پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه

پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه

مقدمه

یونجه (Medicago sativa L.) یکی از مهم‌ترین گیاهان علوفه‌ای برای تغذیه دام می‌باشد که با وسعت کشت جهانی بیش از 40 میلیون هکتار، زراعت آن امروزه بسیار توسعه یافته است (زانگ و همکاران 2010). همزیستی یونجه با باکتری‌های ریزوبیوم همزیست و در نتیجه تثبیت نیتروژن، حفظ ساختار مناسب خاک و اثرات بالقوه این گیاه در مدیریت آفات به عنوان مهم‌ترین گیاه تناوبی، اهمیت آن را در کشاورزی پایدار افزایش داده است (قوامی و همکاران، 1377(. یونجه اتوتتراپلوئید (2n = 4X = 32) و دگرگشن بوده و تنوع ژنتیکی زیادی بین ارقام مختلف آن دیده می‌شود. و به دلیل ظرفیت باززایی خوب درون شیشه­ای آن برای یک مدت زمان طولانی از اهداف مطالعات ﮊنتیکی و زیست شناسی سلولی- مولکولی بوده است (اینچوا و همکاران، 2005و شائو و همکاران، 2000). جنس Medicago ترکیبی از گونه­های چند­ساله و یکساله می‌باشد. یونجه­های یکساله در بیش از 250 منطقه جغرافیایی ایران پراکنده هستند که استان آذربایجان غربی یکی از نواحی رویشی آن‌ها است (حیدری شریف آباد و همکاران، 1379). به طور کلی، اگر ژنوتیپ­های یونجه مورد بررسی قرار گیرند، امکان یافتن یک ژنوتیپ با قابلیت باززایی خوب در ژرم پلاسم یونجه وجود دارد (اینچوا و همکاران،2005). افزایش کیفیت و میزان تولید و مقاومت در برابر بیماری‌ها جزء اهداف اصلی برای اصلاح یونجه (.Medicago sativa L) می‌باشد، اما بیشتر دستاوردها در گذشته با استفاده از روش‌های کلاسیک اصلاحی به دست آمده‌اند ، نه از تکنیک‌های مهندسی و این به علت عدم وجود پروتوکل باززایی مؤفق برای طیف وسیعی از ژنوتیپ های یونجه می‌باشد (لی و همکاران،2009). این گیاه دارای سابقه تاریخی طولانی بوده و قدمت آن به ابتدای تاریخ تمدن می‌رسد (قوامی و همکاران، 1377). احتمالا منشا آن ناحیه‌ی کائوکاسوس (Caucasus) یعنی شمال شرقی ترکیه، ارمنستان و شمال غربی ایران می‌باشد (میکاد و همکاران، 1988). سازگاری یونجه به دامنه‌ی وسیعی از شرایط آب و هوایی سبب شده است که این گیاه در بیش از 40 میلیون هکتار از اراضی دنیا کشت شود (زانگ و همکاران، 2010)، که در این میان آمریکا بیشترین سطح زیر کشت را دارا می‌باشد، بطوریکه آمریکا، اروپای شرقی و آرژانتین به تنهایی %70 مناطق سطح زیر کشت یونجه را به خود اختصاص می‌دهند (ورونسی و همکاران، 2010). در ایران نیز که از خاستگاه‌های اولیه یونجه بشمار می‌رود، این گیاه در 600 هزار هکتار از اراضی کشور کشت می‌شود که از این سطح زیر کشت حدود 3/4 میلیون تن علوفه خشک عاید کشاورزان می‌شود (آمارنامه وزارت جهاد کشاورزی، 1388). جنس Medicago به شاخة گیاهان گلدار^[1]، زیرشاخة نهاندانگان^[2]، ردة دولپه‌ای‌ها^[3]، راستة روزالس^[4] و تیرة پاپیلوناسه‌آ^[5] متعلق است که شامل گونه‌هایی است که از لحاظ ویژگی‌های مورفولوژیکی بسیار متنوع می‌باشند و حدود دو سوم این گونه‌ها یکساله و بقیه چندساله هستند (لسینز و لسینز، 1979 و ورونسی و همکاران 2010).

1-1- تاریخچه و خصوصیات گیاه شناسی یونجه

1-1-1- اهمیت و گیاهشناسی یونجه

یونجة زراعی (Medicago Sativa L.) که ملکه گیاهان علوفه‌ای نیز نامیده می‌شود در بخش وسیعی از اروپا و آمریکا به عنوان مهم‌ترین علوفة لگومی شناخته شده است. این گیاه اغلب جهت مصرف به صورت علوفة خشک، علوفة دِهیدراته، حبه‌های علوفه‌ای، علوفة تازه، کود سبز و گهگاهی چراگاه کشت می‌شود (ورونسی و همکاران2010). بقایای یونجه مواد آلی خاک را افزایش می‌دهد و سیستم ریشه‌ای آن مواد غذایی موجود در اعماق خاک را در بین لایه‌های خاک به حرکت در‌آورده و سبب بهبود ساختار خاک، نفوذپذیری نسبت به آب و ظرفیت نگهداری آب می‌شود. کشت یونجه به مقدار کمی به علف‌کش و آفت‌کش نیاز دارد و به دلیل همزیستی باکتری‌های تثبیت کنندة نیتروژن (Sinorhizobium meliloti) با ریشه آن به کود نیتروژنه نیازی ندارد، که این ویژگی‌ها با ملاحظات ملی و بین‌المللی فعالیت‌های کشاورزی در ارتباط با محیط زیست سازگار می‌باشد. همچنین مزارع یونجه جهت غنی‌سازی تنوع زیستی بسیار مطلوب می‌باشند (ورونسی و همکاران، 2010). این گیاه دارای پروتئین زیادی بوده و حاوی اکثر اسیدهای آمینه، ویتامین‌ها و هیدرات‌های کربن می‌باشد و میزان فیبرعلوفه آن نیز کم می‌باشد (زانگ و همکاران 2010 و مونتیرو و همکاران، 2003).

1-1-2- ژنتیک و گروه‌های مختلف یونجه

جنس Medicago دارای اشکال دیپلوئید و تتراپلوئید M. sativa spp. Sativa،M.Sativa spp. Falcata و M. Sativa spp. Glutinosa می‌باشد، که این گونه‌ها به آسانی به اهم تلاقی یافته و دارای کاریوتیپ مشابهی می‌باشند. یکی از موانع عمده در تبادل ژن بین آن‌ها سطح پلوئیدی است که این عامل می‌تواند با تولید گامت‌های کاهش نیافته مرتفع گردد (مک کوی و بینگهام، 1988). اشکال دیپلوئید و گل ارغوانی M. Sativa، M. Sativa spp. Coerulea نامیده می‌شوند در حالی که اشکال تتراپلوئید و گل ارغوانی M. Sativa، M. Sativa spp. Sativa نامیده می‌شوند که یونجه‌های زراعی چندساله معمولاً در این گروه قرار می‌گیرند. در مقابل فرم‌های بالا، M. Sativa spp. Falcate دارای گل‌های زرد رنگ بوده و اشکال دیپلوئید را شامل می‌شود که دارای 4 گونه چند­ساله تتراپلوئید و دو گونه چندساله هگزاپلوئید می‌باشد (ورنوسی و همکاران، 2010). در حدود 3/1 جنس Medicao را گونه­های یکساله تشکیل می‌دهند که اکثرا دیپلوئید و خودگشن هستند و از بعضی جهات مانند رشد سریع‌تر، کیفیت علوفه ای و مقدار پروتئین خام نسبت گونه­های چند­ساله برتریت نشان می‌دهند (زو و همکاران،1996). یونجه‌­های یکساله (Medic) ممکن است به عنوان یک منبع مفید برای ژن‌های دخیل در صفات زراعی مهم مانند مقاومت به تنش­های زنده و غیر زنده باشند (اینچوا و همکاران، 1999).

1-1-3- انواع یونجه زراعی داخلی

یونجه همدانی: در برابر سرما مقاوم بوده و ارتفاع آن بیش از سایر ارقام سردسیری و نیمه گرمسیری است. به طوری که ارتفاع ساقه به ۸۰ تا ۹۰ سانتی متر می‌رسد. برگ‌های آن کوچک‌تر و نازک‌تر و باریک‌تر از سایر ارقام است. این رقم در ارتفاعات زیاد به خوبی رشد می‌کند. دانه­های آن کوچک و در حدود یک تا ۱/۲ میلی متر است. یونجه همدانی رنگ بنفش دارد و برای کشت در مناطق سرد و مرتفع مناسب است.

قره یونجه: مرکز عمل آوری آن آذربایجان است. در برابر سرما مقاوم است و برای کشت به صورت یونجه یکساله و حتی دیم در مناطق سرد به خصوص آذربایجان مناسب است.

1-2- اهمیت کشت بافت

کشت بافت تکنیکی است که امکان تولید گیاه در محیط درون شیشه­ای را فراهم می‌کند. اساس این تکنیک توتی پوتانسی است که بیان می‌کند هر سلول گیاهی دارای کلیه اطلاعات ژنتیکی لازم برای تبدیل شدن به یک گیاه کامل است. بنابراین کشت سلول، بافت یا اندام این امکان را فراهم می‌کند که با کشت یکی از اجزای فوق سایر قسمت‌های گیاه تشکیل شود. کشت بافت دارای اهداف متعددی است که از جمله مهم‌ترین آنها می‌توان به موارد زیر اشاره کرد:

1- پی بردن به نیازهای تغذیه­ای سلول و توانایی سلول

2- ریزازدیادی یا تکثیر سریع در فضای محدود

3- فراهم آوردن دست ورزی ژن یا مهندسی ژنتیک

4- تولید گیاهان هاپلوئید

5- به نژادی و تهیه نژاد­های مقاوم به شوری وخشکی

6- رفع مشکلات مربوط به رویش سخت بذرها

7- کشت پروتو پلاست و هیبریداسیون سوماتیکی

8- کوتاه کردن مراحل چرخه زندگی گیاه وتسریع گلدهی

9- طولانی کردن مرحله رویشی در گیاهانی که قسمت‌های رویشی آن‌ها مصرف می‌شود(مانند یونجه)

10- تولید گیاهان عاری از ویروس

11- حفظ ونگهداری ذخایر ژنتیکی

12- تولید متابولیتهای ثانویه

13- گلدهی در محیط درون شیشه‌ای

14- رفع مشکلات خودناسازگاری

از مشکلات کشت بافت می‌توان به انواع آلودگی‌های باکتریایی وقارچی اشاره کرد که در برخی از موارد کار را با شکست مواجه می‌سازد. همچنین کشت بافت نیاز به تجربه دارد وگیاهان رشد کرده در محیط درون شیشه­ای به شرایط رطوبت بالا عادت کرده‌اند، بنابراین باید مرحله سازگاری را سپری کرده وسپس به خاک منتقل شوند (حسندخت و همکاران،1385).

1-3- کشت بافت گیاهی

ایجاد انگیزه برای بکارگیری تکنیک­های کشت بافت گیاهی در تکثیر و اصلاح گونه­های گیاهی از کار اولیه مورل (1960) روی تکثیر ارکیده در محیط کشت جدید با غلظت بالایی از نمک‌های معدنی توسط موراشیگ و اسکوگ (1962) ناشی شد. از آن به بعد، این تکنولوژی به صورت قابل توجهی رشد یافت وامروزه یک نقش کلیدی در تکثیر ، اصلاح و مهندسی ژنتیک گیاهی ایفا می‌کند.کشت بافت گیاهی بر پایه سه قابلیت گیاهی استوار است: 1 ـ توانمندی[6]که توان یا ظرفیت توارثی یک سلول گیاهی برای نمو به یک گیاه کامل با القای تحریک مناسب است. توانمندی بر این مطلب دلالت می‌کند که هر سلول واجد تمام اطلاعات لازم برای رشد و تکثیر می‌باشد. گر چه از لحاظ نظری همه سلول­های گیاهی توانمند هستند، با این حال سلول‌های مریستمی بیشترین توان بیان این ویژگی را دارند. 2ـ تمایز زدایی[7]، که توان سلول‌های بالغ برای بازگشت به شرایط مریستمی است و بعد از آن سلول‌ها با بازتمایزی[8] اندام­های جدیدی را سازماندهی می‌کنند. 3ـ شایستگی[9]، که توانایی ذاتی یک سلول یا بافت گیاهی را برای نمو در یک مسیر مشخص بیان می‌کند. برای مثال، سلول­های با شایستگی رویانی توانایی تبدیل شدن به رویان­های کاملاً فعال را دارند. در مقابل این اصطلاح، واژه ناشایستگی یا ناتوانی ریخت زایی بیان می‌شود.

3-1 انواع کشت درون شیشه‌ای :

1 ـ کشت گیاهان کامل ( برای مثال، کشت بذر ارکیده ، کشت دانه رست [10]

2ـ کشت اندام ( برای مثال، کشت مریستم)، کشت شاخساره[11]: کشت ریشه- کشت برگ- کشت به ساک، کشت رویان

3ـ کشت کالوس

4 ـ کشت سلول

5 ـ کشت پروتوپلاست

روش‌های کشت بافت مبتنی بر دو مرحله تمایز زدایی و تمایزیابی می‌باشد. یاخته‌ها، بافت‌ها و اندام‌های گیاهی در طی مرحله تمایز زدایی، توده‌های یاخته‌ای بی‌شکل و متراکمی به نام پینه را تولید می‌نمایند و سپس در شرایط غذایی و محیطی مناسب تمایز یافته و بافت‌های مختلفی را ایجاد نموده و گیاهان کاملی را به وجود می‌آورند. به همین دلیل کشت بافت در مسائل مربوط به رشد و تمایزیابی تحت شرایط باز تولیدی به آزمایش‌های گیاهی کمک گرانبهایی کرده است. کشت بافت در کشاورزی و باغبانی نه تنها به منظور تکثیر گیاهان بلکه اهداف مربوط به جذب مواد غذایی خاک، مقاومت به شوری خاک، حذف عوامل بیماری‌زا، حفظ ذخایـر گیاهی ارزشمند در کشت‌ها و در درجه حرارت‌های پاییـن و اصلاح گیاهان کاربردهای عملی بسیار وسیعی پیدا کرده است. اهمیت کشت بافت گیاهی به اندازه‌ای است که بسیاری از دانشگاه‌های دنیا آن را در دوره‌های آموزشی پیشرفته و مقدماتی خود گنجانیده‌اند و حتی در بعضی از کشورها دوره‌های تخصصی ریزازدیادی را در سطح تولید سازماندهی کرده‌اند (عادلی مسبب، 1378).

یکی از مهم‌ترین مسائل حل نشده در زیست شناسی عمومی، تنظیم رشد و نمو است. یک روش آزمایشی که در پژوهش‌های تنظیم رشد و نمو گیاه، زیاد بکار برده می‌شود، کشت قسمت­های قطع شده گیاهی و ریز نمونه­های بافتی مشخص روی محیط کشت مصنوعی در آزمایشگاه است. اسکوک و همکارانش کشف کردند که اگر بافت آوندی همراه با ریز نمونه­های مغز روی یک محیط کشت شامل اکسین کشت شود، بافت تحریک شده و متحمل تقسیم سلولی می‌گردد. همچنین کشف کینیتین بدین علت مهم بود که مشخص کرد تقسیم سلولی می‌تواند به واسطه ماده شیمیایی ساده­ای تحریک گردد. بنابراین، با کشف کینتین حدس زده شد که ممکن است مولکول‌های طبیعی با

ساختمان مشابه کینتین فعالیت تقسیم سلولی داخل گیاه را تنظیم کنند. که بعضی از سیتوکینین­های مصنـوعی، طبیعی و ترکیباتی مشابه که در کشت بافت استفاده می‌شوند عبارتند از: زآتین، کینیتین (6- فورفوریل آمینو پورین یا N6 – فورفوریل آدنین)، BAP، ZIP، PBA، تیدیازورون. همچنین چندین تنظیم کننده رشد گیاهی که در کشت بافت استفاده می‌شوند شامل: اتیلن، آبسیزیک اسید، سیتوکینین­ها (کینتین)، اکسین­ها (اینولیل 3-استیک اسید) IAA، جیبرلین­ها (جیبرلیک اسید) GA3، زآتین، 2،4- دی کلروفنوکسی استیک اسید (2,4-D)، نفتالن استیک اسید (NAA). اسکوک و میلر (1957) نمونه بی­نظیری از تنظیم هورمونی ریخت­زایی در ریزنمونه­های مغز توتون ارائه کردند. این تحقیق مهم به طور جالب، اثر متقابل ظریف و کمّی بین اکسین و سیتوکینین در کنترل تشکیل جوانه و ریشه از ریز نمونه­های مغز را نشان داد. با ترکیب خاصی از غلظت­های IAA و کینیتین، بافت مغز به صورت کالوس تمایز نیافته­ای رشد کرد و با تغییر نسبتIAA : KIN آن‌ها موفق به تولید جوانه یا ریشه از ریز نمونه­ها شدند (آزادی و همکاران، 1382).

---

[1]. Spermatophyta

[2].Angiospermae

[3].Dicotyledon

[4]. Rosales

[5]. Papilionaceae

[6]-Totipotency

[7]- Dedifferentiation

[8]- Redifferentiation

[9]- Competency

[10]= Seedling

[11]= Shoot tip

فهرست مطالب

عنوان صفحه

فصل اول: کلیات

مقدمه .......................................................................................................................................................................................................................................... 2

1-1- تاریخچه و خصوصیات گیاه شناسی یونجه................................................................................................................................................................3

1-1-1- اهمیت و گیاهشناسی یونجه....................................................................................................................................................................................3

1-1-2- ژنتیک و گروه‌های مختلف یونجه...........................................................................................................................................................................3

1-1-3- انواع یونجه زراعی داخلی .......................................................................................................................................................................................4

1-2- اهمیت کشت بافت..........................................................................................................................................................................................................4

1-3- کشت بافت گیاهی .........................................................................................................................................................................................................5

1- 4- تاریخچه کشت بافت یونجه..........................................................................................................................................................................................7

فصل دوم: بررسی ادبیات موضوع و سابقه تحقیق

2-1- باززایی درون شیشه­ای................................................................................................................................................................................................ 10

2-1-1- باززایی مستقیم در یونجه.......................................................................................................................................................................................10

2-1-2- باززایی غیرمستقیم در یونجه................................................................................................................................................................................13

فصل سوم: روش تحقیق

3-1- رقم مورداستفاده...........................................................................................................................................................................................................24

3-2- محیط کشت، ترکیبات و آماده سازی آن................................................................................................................................................................24

3-2-1- محلول­های ذخیره مواد معدنی برای تهیه محیط کشتSH .......................................................................................................................34

3-2-2- محلول های ذخیره مواد تنظیم کننده رشد....................................................................................................................................................25

3-3- شرایط کشت، ضد عفونی بذر و کشت ریزنمونه­ها..................................................................................................................................................26

3-3-1- باززایی مستقیم از گره ساقه.................................................................................................................................................................................26

3-3-2- سازگاری گیاهچه­ها..................................................................................................................................................................................................28

3-4- باززایی غیرمستقیم ..................................................................................................................................................................................................... 28

3- 5- روش و ابزار گردآوری اطلاعات..................................................................................................................................................................................30

3-6- روش آماری و تجزیه داده­ها.........................................................................................................................................................................................30

فصل چهارم: تجزیه و تحلیل اطلاعات

4-1- القاء جوانه و باززایی .....................................................................................................................................................................................................32

4-1-1- القاء جوانه در محیط کشت SIM I......................................................................................................................................................................32

4-1-2- باززایی شاخساره در محیط کشت SIM I...........................................................................................................................................................35

4-1-3- القاء جوانه در محیط کشت SIM II....................................................................................................................................................................37

4-1-4- باززایی شاخساره در محیط کشتSIM II ........................................................................................................................................................40

4-1-5- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه چند­ساله و یکساله در القاء جوانه و باززایی شاخساره در محیط کشت SIM I....................................43

4-1-5-1- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه­های چند­ساله در القاء جوانه در محیط کشت SIM I...........................................................................43

4-1-5-2- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه­های یکساله در القاء جوانه در محیط کشت SIM I..............................................................................43

4-1-5-3- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه­ چند­ساله در باززایی شاخساره در محیط کشت SIM I.......................................................................44

4-1-5-4- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه­ یکساله در باززایی شاخساره در محیط کشت SIM I..........................................................................45

4-1-6- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه چند­ساله و یکساله در القاء جوانه و باززایی شاخساره در محیط کشتSIM II....................................45

4-1-6-1- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه چندساله در القاء جوانه در محیط کشت SIM II..................................................................................45

4-1-6-2- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه­ یکساله در القاء جوانه در محیط کشت SIM II.....................................................................................46

4-1-6-3- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه چند­ساله در باززایی شاخساره در محیط کشت SIM II.....................................................................47

4-1-6-4- اثر ژنوتیپ­های مختلف یونجه یکساله در باززایی شاخساره در محیط کشت SIM II.........................................................................47

4-2- ریشه­زایی........................................................................................................................................................................................................................48

4-2-1- ایجاد ریشه در یونجه­های چند­ساله......................................................................................................................................................................48

4-2-2- درصد ایجاد ریشه در یونجه­های چند­ساله..........................................................................................................................................................48

4-2-3- درصد ایجاد ریشه در یونجه­های یکساله..............................................................................................................................................................50

4-3- سازگاری و انتقال به شرایط گلخانه...........................................................................................................................................................................50

4-4- القاء کالوس در یونجه­های چند­ساله و یکساله.........................................................................................................................................................51

4-4-1- باززایی غیرمستقیم از کالوس یونجه.....................................................................................................................................................................52

فصل پنجم: نتیجه گیری و پیشنهادات

5-1- یونجه­های چند­ساله.......................................................................................................................................................................................................55

5-1-1- باززایی مستقیم ........................................................................................................................................................................................................55

5-1-1-1- القاء جوانه و باززایی شاخساره تحت تاثیر سطوح مختلف BAP و NAA ..............................................................................................55

5-1-1-2- القاء جوانه و باززایی شاخساره تحت تاثیر TDZ همراه با AgNO₃ .........................................................................................................56

5-2- یونجه­های یکساله..........................................................................................................................................................................................................56

5-2-1- باززایی مستقیم ........................................................................................................................................................................................................56

5-2-1-1- القاء جوانه و باززایی شاخساره تحت تاثیر سطوح مختلف BAP و NAA ..............................................................................................56

5-2-1-2- القاء جوانه و باززایی شاخساره تحت تاثیر TDZ همراه با AgNO₃...........................................................................................................57

5-3- باززایی غیر مستقیم در یونجه­های چند­ساله و یکساله..........................................................................................................................................59

5-4- نتیجه گیری و پیشنهادات...........................................................................................................................................................................................60

فهرست منابع و ماخذ.............................................................................................................................................................................................................61

چکیده انگلیسی.......................................................................................................................................................................................................................67

فهرست جداول

عنوان صفحه

جدول 3- 1- ترکیب محلول­‌های ذخیره (50×‌) پنج گروه نمکی غیر آلی فرمولاسیون SH....................................................................................25

جدول 3-2- ترکیبهای مختلف تنظیم­کننده­های رشدی مورد استفاده در محیط کشت پایه MS حاوی ویتامینهایB5 برای القاء جوانه و باززایی در ارقام و گونه های مختلف یونجه..........................................................................................................................................................................28

جدول 3-3- ترکیبهای مختلف تنظیم­کننده­های رشد مورد استفاده در محیط کشت پایه MS حاوی ویتامین­های B5 برای القاء کالوس در ارقام و گونه­های مختلف یونجه...............................................................................................................................................................................................29

جدول 3-4- محیط کشت­های مختلف حاوی ترکیب­های مختلف تنظیم­کننده­های رشدی مورد استفاده برای رشد کالوس در ارقام و گونه­های مختلف یونجه ...................................................................................................................................................................................................................29

جدول 3- 5- ترکیب­های مختلف تنظیم­کننده­های رشدی مورد استفاده در محیط کشت پایه MS حاوی ویتامین­های B5 برای باززایی غیر مستقیم در ارقام و گونه­های مختلف یونجه.........................................................................................................................................................................29

جدول 4-1- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد................................................................................................................32

جدول 4-2- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در 2 گونه یونجه یکساله M. rigidula و :M. scutellata.......................................................................................................................................34

جدول 4-3- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد شاخساره­های باززا شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد.......................................................................................................36

جدول 4-4- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد شاخساره­های باززا شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله M. rigidula وM. scutellata....................................................................................................36

جدول 4-5- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد..................................................................................38

جدول 4-6- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله M. rigidula و M. scutellata...............................................................................39

جدول 4-7- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد شاخساره­های باززا شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد.............................................................................40

جدول 4-8- نتایج تجزیه واریانس تاثیر محیط کشت­های حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد شاخساره­های باززا شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله M.rigidula و M.scutellata............................................................................42

جدول 4-9- اثر غلظت­های ترکیب مختلف BAP و NAA برای القاء جوانه در سه رقم یونجه چند­ساله.............................................................43

جدول 4-10- اثر غلظت­های ترکیب مختلف BAP و NAA برای القاء جوانه در دو گونه یونجه یکساله.............................................................44

جدول 4-11- اثر غلظت­های ترکیب مختلف BAP و NAA برای باززایی در سه رقم یونجه چند ساله...............................................................44

جدول 4-12- اثر غلظت­های ترکیب مختلف BAP و NAA برای باززایی در دو گونه یونجه یکساله....................................................................45

جدول 4-13- اثر غلظت­های مختلف TDZ به همراه یا بدون AgNO₃ برای القاء جوانه در سه رقم یونجه چند­ساله.......................................46

جدول 4-14- اثر غلظت­های مختلف TDZ به همراه یا بدون AgNO₃ برای القاء جوانه و باززایی در دو گونه یونجه یکساله.........................46

جدول 4-15- اثر غلظت­های مختلف TDZ به همراه یا بدون AgNO₃ برای باززایی در سه رقم یونجه چند ساله............................................47

جدول 4-16- اثر غلظت­های مختلف TDZ به همراه یا بدون AgNO₃ برای باززایی در دو گونه یونجه یکساله.................................................48

جدول 4-17- میزان القاء کالوس در ارقام و گونه­های مختلف یونجه تحت تاثیر محیط کشت­های مختلف CIM............................................51

جدول 4-18- وزن کالوس­های رشد یافته در محیط CGM در ارقام چند­ساله قره یونجه و همدانی..................................................................52

فهرست اشکال

شکل 3-1- ضد عفونی و کشت بذور یونجه جهت تهیه ریزنمونه..................................................................................................................................27

شکل 4-1- مراحل مختلف القاء جوانه، شاخساره­زایی و ریشه­زایی در ژنوتیپ­های چند­ساله یونجه......................................................................49

شکل 4-2- مراحل مختلف القاء جوانه، شاخساره­زایی و ریشه­زایی در دو گونه یونجه یکساله................................................................................51

شکل 4-3- مراحل مختلف باززایی غیرمستقیم یونجه چند­ساله....................................................................................................................................53

فهرست نمودارها

عنوان صفحه

نمودار 4-1- تاثیر محیط کشت­های SIM I حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد.....................................................................................................................................33

نمودار 4-2- تاثیر محیط کشت­هایSIM I حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در 2 گونه یونجه یکساله M .rigidula و. M. scutellata...........................................................................................................................................................34

نمودار 4-3- تاثیر محیط کشت­های SIM I حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد گیاهچه­های باززا شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد.....................................................................................................................................36

نمودار 4-4- تاثیر محیط کشت­های SIM I حاوی سطوح مختلفBAP , NAA بر روی صفت میانگین تعداد گیاهچه­های باززا شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله M .rigidula و. M. scutellata................................................................................................................................37

نمودار 4-5- تاثیر محیط کشت­های SIM II حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند­ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد.......................................................................................................38

نمودار 4-6- تاثیر محیط کشت­های SIM II حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد جوانه­های القاء شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله M .rigidula و. M. scutellata.................................................................................................40

نمودار 4-7- تاثیر محیط کشت­هایSIM II حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد گیاهچه­های باززا شده در هر ریزنمونه در 3 رقم یونجه چند ساله همدانی، قره یونجه، اردوباد....................................................................................................41

نمودار 4-8- تاثیر محیط کشت­هایSIM II حاوی سطوح مختلف TDZ همراه و بدون AgNO₃ بر روی صفت میانگین تعداد شاخساره­های باززا شده در هر ریزنمونه در 2 گونه یونجه یکساله...........................................................................................................................................................42

نمودار 4-9- درصد ایجاد ریشه تحت تاثیر ترکیبات مختلف تنظیم کننده­های رشد (mg/l 5/1 , 1) NAA و (mg/l 5/1 , 1) IBA در سه رقم یونجه همدانی، قره یونجه و اردوباد...............................................................................................................................................................................49

نمودار 4-10- درصد ایجاد ریشه تحت تاثیر ترکیبات مختلف تنظیم کننده­های رشد (mg/l 5/1 , 1) NAA و (mg/l 5/1 , 1) IBA در دو گونه یونجه M. rigidula و M. scutellata........................................................................................................................................................................50

خرید فایل

لینک منبع :پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه

پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام ... farasubaran.meeblog.ir/post/9‎Cachedپایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه. شعار همیشگی ما مشتری مداری و کسب رضایت شما عزیزان می باشد. پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام ... downloadmagale.cero.ir/product-324039-پایان-نامه-بررسی-پتانسیل-ریزازدیادی-و-باززایی-در-ت.aspx‎Cachedفرمت فایل: doc حجم فایل: 4078 کیلوبایت تعداد صفحات فایل: 68. پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه ... پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام ... orbitalmoj.nisblog.ir/post/604‎Cached16 سپتامبر 2016 ... پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه - <-BlogAndPostDesc-> کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... kmyabdlcnt.ir/post.php?id=8592‎Cached1 نوامبر 2016 ... کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه. دریافت فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... www.risearticle.ir/download/10311‎Cached30 ا کتبر 2016 ... دریافت فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه – پرداخت و دانلود آنی. Posted on ... برترین پکیج پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... ramtindlw.ir/article161.html‎Cached1 نوامبر 2016 ... اینک شما با جستجوی ((پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه)) وارد صفحه فروش فایل ... کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... apadanarc.pdfblog.ir/post/516‎Cached11 ا کتبر 2016 ... کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه - - آپادانا. دریافت فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... yaghutweb.cloudsite.ir/دریافت-فایل-پایان-نامه-بررسی-پتانسیل-ر/‎Cached27 سپتامبر 2016 ... دریافت فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه – پرداخت و دانلود آنی. نویسنده ... دانلود پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ... nabprojectfile.ir/?p=11906‎Cached12 ا کتبر 2016 ... اینک شما با جستجوی ((پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه)) وارد صفحه فروش فایل ... کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در ... faraztabiat.blogroom.ir/post/989‎Cached16 نوامبر 2016 ... کاملترین فایل پایان نامه بررسی پتانسیل ریزازدیادی و باززایی در تعدادی از ارقام زراعی و گونه های یکساله یونجه - - فراز طبیعت.